开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、拟研究的问题
本课题目的在于建立一种融合表达小分子蛋白的新方法。融合表达是通过基因重组技术将外源小分子蛋白拼接于融合伴侣下游进行表达，然后通过酶切或化学切割释放出目的小分子蛋白的技术。目前此技术多应用于解决基因工程表达中产物被宿主细胞内蛋白酶降解的缺点。在进行基因拼接融合时应保持目的小分子蛋白编码基因与融合伴侣编码基因阅读框架一致。另外，在融合伴侣与目的蛋白之间需要设计1个或1个以上的蛋白酶切位点（如肠激酶切割位点）或化学切割位点或可以自己切割的蛋白内含子（intein），这样就可以在融合蛋白表达出来之后通过酶切或化学切割或诱导自切割等手段释放出目的小分子蛋白。
二、采用的研究手段
1、水蛭素III（HV3）融合标签与目的多肽露那辛（Lunasin）融合基因的设计与克隆。
2、水蛭素III-露那辛融合蛋白表达菌株的构建。
将步骤1中所述融合基因用NheⅠ及Hind Ⅲ双酶切后亚克隆到表达载体pTASH的相应酶切位点，得到的重组表达载体命名为pTASHL，用CaCl2法将重组表达质粒pTASHL转化E.coli JM109宿主菌，得到rHV3-Lunasin融合蛋白表达工程菌。
3、水蛭素III-露那辛融合蛋白的表达。
接种表达正确的工程菌于50ml/250ml种子培养基(即LBA)中37℃振荡培养14h，按2%接种量转移至50ml/500ml发酵培养基中37℃振荡培养16-20h。
4、融合蛋白rHV3-Lunasin的制备。
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