一、研究背景
罗汉果是我国特产的药用植物,性凉、味甘、无毒,有润肺止咳、凉血滑肠之功效[1], 可用于多种呼吸系统、消化系统的疾病。其抑菌成分按提取部位分为根、茎、叶、花、果提取物,根提取物有抗炎、镇痛、解痉、降酶等多种作用,茎和叶提取物中对某些球菌有抑制作用,果实提取物对变形链球菌强抑制作用,花提取物含皂苷等成分。以无水乙醇溶液作提取剂,在超声波条件下,旋蒸仪浓缩粗提取,装柱洗脱纯化后可进行管碟法测定最佳抑菌成分[2]。罗汉果抑菌活性不是由罗汉果苷, 而是由罗汉果中另外的活性组分或成分产生的。罗汉果具有进一步开发为抗菌药物和保健品的潜力[3]。
沙棘果(HippophaerhamnoidesL.)为胡颓子科沙棘属植物沙棘的果实[4],又名醋柳果,酸刺果,它是一种小浆果植物,落叶灌木或小乔木。,原产于温带,亚热带的欧亚地区。它的果实和叶子中含有丰富的氨基酸,维生素和多种生物活性物质,具有显著的治病功效和营养保健作用,诸如补脾健胃,活血化瘀和清热止泻等[5],这是现代医学和食品功能化学关注的焦点。近年来,植物多糖抑菌研究效果表明,植物多糖对多种细菌具有抑菌作用,而且抑菌作用随多糖的浓度升高而加强。目前已经发现沙棘的叶子中还有黄酮类物质及多糖类物质[6],在微波辅助条件下沙棘叶中的多糖提取率已经得到显著提高。分离提取沙棘中有效生物活性成分,研究其抑菌作用,作为生物防腐剂,取代各种化学防腐剂和添加剂,开发一种新型天然防腐剂具有重要意义。
姜科植物益智,主要分布于中国海南、广东等地,其干燥成熟果实益智仁常可入药[7]。益智性温、微辛、有特异香气、味苦,归脾、肾经。其具有温脾止泻摄涎,暖肾缩尿固精等功效[8],常用于治疗脾胃虚寒,呕吐,泄泻,腹中冷痛,口多唾涎,肾虚遗尿,尿频,遗精,白浊。益智仁提取物中含有挥发油、益智仁酮、多种维生素、氨基酸、脂肪酸、胺类等[9],对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌及黑曲霉等活性有明显抑制作用,且具有较好的耐热、耐pH及耐受紫外线照射的抑菌性能。
对单一物质的抑菌成分研究已非常广泛,但对多种物质协同抑菌效果的研究却甚少。抑菌成分的提取方法有很多,传统提取方法主要有溶剂提取法、分子蒸馏法、水蒸汽蒸馏法。而现代提取方法主要有超临界流体萃取、超声波辅助萃取、微波提取、酶法提取、仿生提取等[10]。本实验采用溶剂提取法对三种植物分别进行提取,用多级柱分离纯化其复配物。
二、研究内容
1) 按溶剂极性进行萃取富集;
2) 多级柱分离纯化;
3) 应用紫外扫描、HPLC、HPLC-MS进行主要抑菌成分鉴定。
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