开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
千层纸素苷抑制TGF-beta;诱导肝星形细胞LX-2活性作用研究
- 概述。
千层纸素主要存在于植物黄芩中，黄芩，中药名。别名山茶根、土金茶根，是唇形科黄芩属多年生草本植物；肉质根茎肥厚，叶坚纸质，披针形至线状披针形，总状花序在茎及枝上顶生，花冠紫、紫红至蓝色，花丝扁平，花柱细长，花盘环状，子房褐色，小坚果卵球形，花果期7～9月。产于黑龙江，辽宁，内蒙古，河北，河南，甘肃，陕西，山西，山东，四川等地，中国北方多数省区都可种植【1】。黄芩中存在的千层纸素对多种肿瘤细胞的增殖具有抑制作用。Hu等研究千层纸素对人肝癌细胞的毒性作用，发现不同浓度的千层纸素作用于肝细胞48h后，可明显抑制细胞的增殖【2】。
TGF-beta;即为转化生长因子-beta;，（transforming growth factor-beta;,TGF-beta;)是属于一组新近发现的调节细胞生长和分化的TGF-beta;超家族。起初对TGF-beta;的生物学功能研究主要在炎症、组织修复和胚胎发育等方面，近年来发现TGF-beta;对细胞的生长、分化和免疫功能都有重要的调节作用。TGF-beta;1、beta;2和beta;3功能相似，一般来说，TGF-beta;对间充质起源的细胞起刺激作用，而对上皮或神经外胚层来源的细胞起抑制作用【3】。
肝星形细胞 （ Hepatic stellate cell，HSC） 是肝纤维化进程的核心环节，早期肝纤维化尚可逆转至正常，此逆转过程与肝星形细胞的状态密切相关。转化生长因子-beta;1( transformimg growthing factor-beta;1)在 肝纤维化发展过程中具有活化肝星状细胞( hepatic stellate cell, HSC) ,促进胶原蛋白基因表达的作用, 是肝纤维化最重要的始动因子之一【4】。
- 拟研究的问题
- 探究千层纸素苷是否可以抑制TGF-beta;诱导肝星形细胞LX-2活化。
- 进一步研究千层纸素苷抑制TGF-beta;诱导肝星形细胞LX-2活化的作用机制。
三、拟采用研究手段
1、细胞培养：
人源肝星形细胞 LX-2用含2% Gibco进口胎牛血清DMEM培养基中培养。培养环境37°C、5% CO2。
2、蛋白的提取：
根据细胞积压体积加入适量的蛋白裂解液（50 mM Tris（pH7.4）、150 mM NaCl、1% NP-40、0.1% SDS），加入四种蛋白酶抑制剂（1% PMSF、0.1% NaF、0.1% Leupeptin、0.1% DTT），重悬细胞，冰上放置40-60 min,充分裂解细胞。将细胞裂解液4°C12000 rpm离心20 min，吸取上清液，即为组织细胞的总蛋白。用BCA法测定蛋白含量，按体积3：1加入4times;loading buffer混匀，沸水浴变性8 min后，如不立即使用，可以放在-20°C保存。
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