开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
抗人DLL4单克隆抗体的ADC药物的生物学活性初步研究
课题简介 Dll4(Delta like 4)是Notch信号通路中 Notch 受体的一个重要配体,DLL4通过与相邻细胞表面 Notch 受体的结合,参与调控毗邻细胞的增殖、凋亡、分化以及干细胞增殖和更新等等生物学过程。此外DLL4在人类肿瘤组织中过表达,并参与肿瘤血管的发生发展,到目前为止,人们先后在肾癌、膀胱癌、结肠癌、脑瘤和乳腺癌等肿瘤血管中均观察到DLL4的过表达。近年来多项研究发现, Dll4/Notch 信号通路在肿瘤发生、 肿瘤血管生成以及肿瘤干细胞的增殖与更新等肿瘤发生发展过程中发挥了重要作用。将抗人DLL4单克隆抗体制成具有靶向性的抗体偶联药物,可通过药物靶向性使毒素分子发挥更高药效的同时,减少对机体正常细胞的毒害作用,以达到高效低毒的治疗效果。这不仅能更高的发挥药效,更能减轻病人痛苦。
解决问题
- 获得ADC药物 2. ADC生物学活性初步研究
材料
人脐静脉内皮细胞(HUVEC)获自美国典型培养物保藏中心(ATCC)。 我们的实验室保存了人乳腺癌细胞系(MCF-7和MDA-MB-231)和HEK-293T细胞。所有细胞系在供应商推荐的培养基条件下培养,并使用标准细胞培养技术在5%CO 2的气氛中于37℃温育。BALB / c裸鼠(雌性,6周龄)获自扬州大学比较医学中心,扬州,中国。 所有动物均按照扬州大学比较医学中心的标准进行治疗,所有动物实验均按照中华人民共和国卫生部动物实验。
研究计划
抗人类Delta-like 4(DLL4)单克隆抗体MMGZ01对hrDLL4具有高亲和力并阻止DLL4介导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表型,促进未成熟血管,并有效减少体内乳腺癌细胞生长。为了开发更有效的疗法,我们将MMGZ01与一种小分子细胞毒性剂缀合auristatin E(MMAE),用接头产生抗体药物偶联物(ADC),并对其生物学活性进行初步研究。
预备检验方法
- 制备抗DLL4抗体MMGZ01和ADC
- 疏水相互作用色谱(HIC)分析
- MMGZ01或ADC的内吞作用和转运
- 蛋白质印迹分析
- ADC的有效性测定
- 体外培养的ADC细胞杀伤能力评价
- ADC结合的流式细胞术分析
- 通过ADC诱导细胞凋亡
- 评估细胞周期中的ADC
- 评估异种移植肿瘤模型中ADC的抗肿瘤效果
- 免疫组织化学和免疫荧光
- 统计分析
文献综述
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