细胞扩增阶段不同厂家摇瓶对CHO细胞生长的影响
背景
近年来，我国治疗性单克隆抗体产业飞速发展，CHO细胞表达系统在该行业内应用广泛，相应的细胞培养技术成为当下的研究热点。而在生产过程中发现在细胞扩增阶段，不同厂家的摇瓶对同一批CHO细胞的生长具有不同的影响，本文从同一批次培养的CHO细胞，在不同厂家生产的摇瓶内进行培养的条件下入手，对CHO细胞生长的差异性进行探究。
CHO细胞简介
CHO 细胞（中华仓鼠卵巢细胞，Chinese Hamster Ovary Cells）是广泛应用的哺乳动物细胞表达系统，是最具代表性的动物细胞表达系统，被广泛应用于生物制药领域。 它建株1957年，由美国科罗拉多大学Theodore T. Puck 从一成年雌性中 国仓鼠卵巢中分离得到，是一种连续细胞系，能传百代以上，具有永生 性。 后来陆续又有很多科学家用药物加压、极端条件筛选和诱导突变 等方法筛选得到了一系列不同表型的CHO 细胞株[1]，如 DUKX-B11、 DG-44 和 CHO-K1 等。 CHO 细胞能用于表达各种复杂的重组蛋白。 据统计，70%以上的 动物细胞表达药物产品都是以CHO 细胞为表达宿主[2]。 2011 年 6 月 批准的 27 种单克隆抗体中，其中 13 种就是通过 CHO 细胞表达的，占 了约 50%的比例。 CHO 细胞之所以成为最受欢迎的宿主细胞， 主要在于其易于培 养以及基因操作，而且相比其他表达系统，它还具有许多优点[3-4]：①具 有准确的转录后修饰功能，表达的糖基化药物蛋白在分子结构、理化 特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子；②具有产物胞外分泌 功能，便于下游产物分离纯化；③具有外源重组基因的高效扩增和表 达能力；④既可贴壁生长也可以进行悬浮培养，且有较高的耐受剪切 力和渗透压能力，外源蛋白表达水平较高；⑤CHO 细胞属于成纤维细 胞，很少分泌自身的内源蛋白，利于外源蛋白的后分离。目前已上市、进入临床和临床前研究阶段的大部分治疗性单克隆抗体采用该表达系统进行生产。用于生 产过程的细胞培养工艺应能持续稳定地生产出质量 一致的合格产品，同时具有较好的生产效率和效益。
无血清培养基简介
无血清培养基是继天然培养基、合成培养基之后的第三类培养基。 与传统的培养基相比，无血清培养基不含动物血清或其他动物提 取成分，但仍可满足细胞在体外较长时间生长、繁殖的一种培养基。无 血清培养基由基础培养基和添加组分两部分组成。基础培养基含有各 种营养物质，能维持组织或细胞的生长、发育、遗传、繁殖等一系列生 命活动。 目前应用最广泛的是MEM、DMEM、RPMI1640 等。 添加组分 为各种代替血清的因子总称，主要包括促贴壁物质、生长因子与激素、 酶抑制剂、结合蛋白以及微量元素等几大类。 这些因子既能满足细胞 的培养要求，又能有效避免因使用血清带来的诸多不利因素。
CHO细胞密度与细胞活力的检测方法
测定细胞密度和活力，使用自动细胞计数仪进行检测，测定细胞的存活率及细胞密度，以培养天数为横坐标，细胞密度和细胞活力分别为纵坐标绘制曲线，最后将不同曲线进行对比。
实验设计
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