课题名称 pcDNA3.1-Bcl6真核表达载体的构建及其在HEK293T中的表达和Western Blotting检测课题性质 radic;基础研究应用课题 设计型 调研综述 理论研究开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）一、课题的研究背景、意义和目的滤泡辅助性T细胞（T follicular helper cells, Tfh cell）是CD4 效应T细胞中一类新发现的位于淋巴滤泡的细胞亚群。
Tfh细胞对生发中心(germinal center, GC) 的形成起着关键作用，并且影响着浆细胞分化、抗体亲和力成熟、抗体同型转换和记忆B 细胞产生等重要生物过程。
Tfh细胞与自身免疫性疾病的产生具有密切的关联，研究Tfh细胞的产生和分化机制对自身免疫性疾病的预防、诊断、治疗都有重要意义。
近些年的研究表明，Bcl-6在Tfh细胞中高表达，T细胞缺乏Bcl-6则不能发育成为Tfh细胞，且不能维持GC的反应，同时也是Tfh细胞分化中的必要和关键因子，但是Bcl-6介导CD4 T细胞转化为Tfh细胞的具体机制，目前尚不明确。
随着人们对Tfh细胞研究不断扩大，Tfh细胞的产生与分化的机制显得尤为重要。
Bcl-6作为Tfh细胞分化中的最关键的转录因子，构建Bcl-6的哺乳动物细胞的表达系统及其相关的生化分析是探索Bcl-6在T细胞中的功能和影响其表达的因素的重要参考和研究模型。
pcDNA3.1（ ）质粒是哺乳动物细胞的高表达载体，HEK293T是具有高转染率的细胞系，利用分子生物学技术构建表达载体，在体外表达目的蛋白，该项技术广泛运用于各种蛋白分子的研究。
本课题在课题组前期对Tfh细胞初步研究的基础上，对Tfh细胞关键转录因子Bcl-6进行分子构建、表达和生化分析，通过Western Blotting分析目的蛋白的表达量，用于评估该模型的表达效率。
二、课题研究的主要内容1、构建哺乳动物的表达载体（pcDNA3.1（ ）-Bcl-6质粒）2、转染HEK293T细胞并诱导Bcl-6表达3、通过Western blotting检测目的蛋白的表达水平。
三、研究难点1、pcDNA3.1（ ）-Bcl-6质粒的构建2、转染HEK293T细胞株及诱导表达3、Western blotting的操作及数据处理分析四、进度安排2018.3－2018.4 查阅文献，了解实验相关背景，确定实验具体内容，实验相关物品的准备2018.4－2018.5 开展实验，构建质粒，转染，表达，分析2018.5－2018.6 补充整理数据，撰写论文五、综述Bcl-6调控Tfh细胞分化的研究进展摘要：滤泡辅助性T细胞（T follicular helper cells, Tfh cells）是一种重要的参与自身免疫调控，并且对淋巴系统中生发中心的形成起关键作用的CD4 T细胞的亚群。
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