一.课题研究背景及目的
我国幅员辽阔,具有丰富的草药资源,日常中无论是药材还是食物,我国人民都与各种中草药有着密切的联系。如薄荷,大黄,甘草,金银花等药草在生活中有着至关重要的地位。由于草药的天然无污染,耐药性好,成本低廉等优点,从中草药中提取各类抗菌活性物质用于医疗方面的技术越来越收到社会的重视。目前也已有大量文献报道中草药提取物具有可喜的抗菌效果。
植物内生菌是指在植物组织内繁衍生长,与植物形成和谐生长关系的一类微生物。内生菌不仅起到植物所必需的固氮作用,还能分泌植物所需的某些促进生长的物质甚至起到防菌防虫害的作用。近年来也陆续有各种论文报道表明内生菌在提取防菌活性产物方面有着不可替代的优势。
本研究目的在于将中华传统药用植物内生菌代谢的活性产物成功提取并进行分析,为后续深入研究各种类内生菌的抗菌作用提供物质基础,同时 可能会在生物防治方面取得一定的突破。
二.主要内容
本实验建立在实验室已有的微生物培养及代谢产物提取的技术上,对不同的中草药采取最优化的提取方法获得次级代谢产物,并进一步进行抑菌性实验。主要内容包括:
1. 各类中草药内生菌的获取及培养
将各类中草药进行表面消毒灭菌后,按照实验室无菌操作的方法,将所需植物部位剪切成小块接种于LB培养基上。每个植物的相同部位设置3个平行对照组,以最后一次清洗无菌水作为对照,于28摄氏度恒温箱倒置培养至菌体生长。对所得菌体进行形态学分析以排除杂菌污染。
2. 内生菌的扩大培养及次级代谢产物的提取
将纯化培养后的内生菌接种于LB液体培养基,放入摇床中进行发酵培养。对所得菌液探寻合适的提取方法并进行适当的优化以获得目标次级代谢产物。
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