开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
全人源VEGF165单克隆抗体的纯化及肽图分析
[研究的主要目的和意义]
血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是内皮特异性的有丝分裂原，有增强内皮细胞的生存能力，诱导毛细血管芽新生、增加微血管通透性、促进细胞移行和抑制凋亡等多种功能［3］,是很强的促血管生成因子，能特异性刺激内皮细胞的增殖，在实体瘤的血管生成中起关键作用［4 -8］。全人源VEGF165单克隆抗体能与VEGF特异性结合，从而阻止VEGF刺激产生的肿瘤血管生成和促进肿瘤生长的作用。该抗体由本实验室基因工程改造获得的能适合生产且具有高表达量的CHO 细胞株表达。本课题的内容首先是建立以亲和层析、阴阳离子交换层析为方法的适合实验室规模的抗体纯化工艺，制备全人源VEGF165单克隆抗体的实验室标准品。单抗的质量控制项目主要包括理化检测、含量、纯度、活性、安全性、结构鉴别等几个方面[9]，其中肽图分析是单克隆抗体一级结构鉴别的基础方法，我们对纯度达到质量标准的全人源VEGF165单克隆抗体进行质控部分的肽图检测，建立该抗体的RP-HPLC肽图分析方法,检测各批次抗体一级结构的一致性。
[研究的方法与手段]
治疗用抗体纯化工艺选择
层析技术是抗体分离纯化的核心技术，一般采用经典的三步纯化策略：粗纯-中间纯化-精细纯化。其中，粗纯的主要目的是捕获、浓缩和稳定样品；粗纯一般使用蛋白A亲和层析一步即可达到95%以上的纯度；中间纯化和精细纯化去除特定的杂质，如HCP、DNA、聚集体和变体等，常用的层析技术有离子交换、疏水层析等，达到最终治疗用抗体所需的纯度。
一.不同亲和层析介质捕获技术及优化策略
目前，约70-80%的抗体纯化使用Protein A、Protein G 亲和层析[10]。
1.1ProteinA亲和色谱是纯化抗体的首选方法之一
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