1.本课题的研究目的及意义凝血酶是一种天然的丝氨酸蛋白水解酶,在体内以凝血酶原(凝血因子Ⅱ)的形式存在。
可识别并水解纤维蛋白原,生成纤维蛋白,是参与机体凝血过程中各个反应的关键酶。
在一定条件下,凝血酶原被激活后形成有活性的凝血酶,其分子量为335800Da,等电点约5.0-5.5,由A、B两个亚基通过二硫键连接组成,其中A链含49个氨基酸残基,又称轻链;B链由259个氨基酸残基组成,又称重链。
凝血酶成品为白色无定形粉末,溶于水,不溶于有机溶剂。
本次研究拟采用层析法对采用基因工程制备的重组人凝血酶进行分离纯化。
层析,即利用各组分性质的不同,将多组分混合物进行分离及测定的方法。
层析系统由固定相和流动相组成,当流动相流经固定相时,不同组分在两相间的分配系数不同,随流动相流动的速率不同,从而分离开来。
层析操作有很多种,在实际生产中,一般使用层析柱进行离子交换层析、疏水层析、凝胶层析以及亲和层析。
本课题研究的目的:主要是通过研究凝血酶的性质、结构以及不同层析方法及其介质的性能、特点,从而开发一个高效、经济并能保持其活性的重组人凝血酶分离纯化工艺,通过大规模生产获得其成品并产生经济效益。
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